REALIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

FUNDAMENTO:

Los medios de cultivo, que pueden ser tanto gelatinosos como líquidos, contienen los nutrientes que van a alimentar a los microorganismos que más tarde se cultiven en ellos, y pueden contener suero, sangre o vitaminas.

OBJETIVOS:

Preparar medios estériles para el posterior cultivo de microorganismos.

MATERIAL:

- Piseta
- Probeta
- Frasco de rosca
- Embudo
- Varilla
- Agar nutritivo
- Vidrio de reloj
- Espátula
- Balanza
- Cremallera
- Pipeta de cristal

CÁLCULOS:

23gr - 1000ml       x = 6,9 gramos
x       -  300ml

PROCEDIMIENTOS:

Para medios en placa de Petri:
Pesamos la cantidad necesaria de agar en la balanza, con el vidrio de reloj y la espátula.

Vertemos el agar en el frasco de rosca con ayuda del embudo y agua destilada, y enrasamos hasta la cantidad recomendada por el fabricante. 

Calentamos la disolución en el microondas hasta que se vuelva transparente.

 A continuación, lo metemos al autoclave para esterilizarlo,con la rosca sin apretar del todo, y un papel escrito a lápiz con el contenido del frasco.

Cuando lo saquemos del autoclave, llevamos el medio de cultivo y las placas de Petri ya rotuladas a la cabina de seguridad, la cual debe estar desinfectada mediante la luz UV y un algodón con alcohol. Abrimos todas las placas de Petri y vamos vertiendo el medio en cada una de ellas.

Las dejamos solidificar dentro de la cabina, y cuando ya hayan gelificado, las cerramos, dejándolas boca abajo, para evitar errores en el cultivo. Si se vierte el medio en las placas fuera de la cabina de seguridad, es importante que se haga en la presencia de un mechero Bunsen. Al abrir y cerrar el 
frasco se debe esterilizar el borde. Echaremos el medio haciendo una torre con las placas para facilitar el trabajo. Al finalizar, las placas se guardan en la nevera.

Para medios en tubos:
Para realizar la disolución de agar en agua destilada, se siguen los mismos pasos que en las placas de Petri, hasta después de sacar el medio del microondas. Con la pipeta de cristal, pasamos el medio del frasco a los tubos. Una vez estén los tubos llenos, se colocan en una gradilla y se tapan con papel de plata rotulado con el contenido del frasco, y se esterilizan en el autoclave. A continuación, cuando estén estériles, se colocan sobre la gradilla en una posición inclinada para que al gelificar quede una mayor superficie para el cultivo.

Cuando hayan gelificado, se colocan en la posición normal en la gradilla y se guardan en la nevera.


Funcionamiento del autoclave:
Se echa agua hasta cubrir la resistencia.
A los tubos se les pone papel plata y se rotulan, y a los frascos se les pone papel escrito a lapiz. No se puede meter nada completamente cerrado al autoclave porque puede romperse.
Se pone el control de esterilización.
Se cierra el autoclave, sin apretar mucho ya que al hacer vacío, nos costará más abrirlo.
Se enciende, y debemos dejar la válvula de drenaje cerrada y la de vapor abierta.
Se elige el programa, y se le da a START.
Cuando el autoclave llegue a los 100ºC se cierra la válvula del vapor.
Al acabar, pita. Cuando la temperatura baja de 100ºC (también pita), la presión va disminuyendo, y podemos ir abriendo poco a poco la válvula.
Se abre cuando la presión esté a 0 atmósferas, y bajo ningún concepto se podrá abrir antes.

Funcionamiento de la cabina de seguridad:
Se enciende 10 minutos antes para que filtre el aire, y unos 5 minutos antes se enciende la luz UV para esterilizar la superficie. Tanto antes como después de usarla se desinfecta la superficie con un algodón con alcohol, y se coloca un papel de filtro para trabajar.

RESULTADOS:
Como resultados de esta práctica tenemos medios de cultivo en tubos y placas, preparados para poder cultivar directamente.