TINCIÓN DE GRAM
FUNDAMENTO:
Las bacterias gram positivas tienen una pared bacteriana muchisimo más gruesa que las bacterias gram negativas, por lo que al teñirlas con un colorante, este penetra hasta el fondo de la pared en las positivas y se queda practicamente en la superficie de las negativas, y al lavar con alcohol y acetona el colorante de las negativas se va casi todo, por lo que al microscopio las podemos diferencias por el color, ya que en las positivas es lila, y en las negativas es rosa.
OBJETIVO:
Realizar una tinción para conocer el tipo de bacterias de un cultivo, si son gram positivas o gram negativas.
MATERIAL:
Mechero Bunsen
Portas
Pipetas pasteur
Asa de siembra
Muestra de bacterias 2 y 9
Soporte para portas
Batea
Lugol
Mezcla 1/1 de alcohol y acetona
Cristal violeta
Agua destilada
Safranina
PROCEDIMIENTO:
Encendemos el mechero bunse, esterilizamos el asa de siembra y cogemos una muestra de bacterias.
La depositamos en el porta y realizamos una extensión, y la fijamos con la llama del mechero.
Ponemos el porta en el soporte, y cubrimos la extensión con cristal violeta, y cronometramos un minuto. Decantamos el exceso de cristal violeta, y lavamos con agua destilada. Cubrimos con lugol durante otro minuto (el lugol va a formar un compuesto insoluble en agua con el cristal violeta, es un mordiente). Lavamos con agua destilada y escurrimos.
A continuación cubrimos la extensión con una solución 1/1 de alcohol y acetona durante 30 segundos, en la que si es soluble el compuesto de cristal violeta y lugol, por lo que en bacterias gram negativas se decoloran.
Volvemos a lavar con agua destilada.
Cubrimos la extensión con safranina durante dos minutos y lavamos con agua destilada.
Dejamos secar o secamos con un secador y observamos al microscopio.
RESULTADO:
Si las bacterias son gram positivas, las observaremos de un color lila azulado, y si son gram negativas serán de un color rosa.
Las bacterias gram positivas tienen una pared bacteriana muchisimo más gruesa que las bacterias gram negativas, por lo que al teñirlas con un colorante, este penetra hasta el fondo de la pared en las positivas y se queda practicamente en la superficie de las negativas, y al lavar con alcohol y acetona el colorante de las negativas se va casi todo, por lo que al microscopio las podemos diferencias por el color, ya que en las positivas es lila, y en las negativas es rosa.
OBJETIVO:
Realizar una tinción para conocer el tipo de bacterias de un cultivo, si son gram positivas o gram negativas.
MATERIAL:
Mechero Bunsen
Portas
Pipetas pasteur
Asa de siembra
Muestra de bacterias 2 y 9
Soporte para portas
Batea
Lugol
Mezcla 1/1 de alcohol y acetona
Cristal violeta
Agua destilada
Safranina
PROCEDIMIENTO:
Encendemos el mechero bunse, esterilizamos el asa de siembra y cogemos una muestra de bacterias.
La depositamos en el porta y realizamos una extensión, y la fijamos con la llama del mechero.
Ponemos el porta en el soporte, y cubrimos la extensión con cristal violeta, y cronometramos un minuto. Decantamos el exceso de cristal violeta, y lavamos con agua destilada. Cubrimos con lugol durante otro minuto (el lugol va a formar un compuesto insoluble en agua con el cristal violeta, es un mordiente). Lavamos con agua destilada y escurrimos.
A continuación cubrimos la extensión con una solución 1/1 de alcohol y acetona durante 30 segundos, en la que si es soluble el compuesto de cristal violeta y lugol, por lo que en bacterias gram negativas se decoloran.
Volvemos a lavar con agua destilada.
Cubrimos la extensión con safranina durante dos minutos y lavamos con agua destilada.
Dejamos secar o secamos con un secador y observamos al microscopio.
RESULTADO:
Si las bacterias son gram positivas, las observaremos de un color lila azulado, y si son gram negativas serán de un color rosa.
En esta preparación, observamos bacterias en forma de bacilos, Gram positivas, correspondientes a la muestra número 2 (primera imagen) y a la muestra 9 (segunda imagen).
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