SIEMBRA POR AGOTAMIENTO EN AGAR SANGRE, LEVINE Y MCCONKEY
OBJETIVO:
Mediante la siembra de bacterias en estos medios, con diferentes composiciones, podremos conocer algunas funciones específicas de las bacterias que nos ayudaran a clasificarlas taxonómicamente.
FUNDAMENTO:
Los medios sobre los que se realiza la siembra están compuestos por diferentes ingredientes, de los cuales algunos inhiben el crecimiento de algunas bacterias, otros las ayudan a proliferar, y otros nos permiten observar funciones de la bacteria mediante cambios de color (pH) o aparición de estrías incoloras, por ejemplo.
MATERIAL:
Cultivo celular número 2 y 9
Asa de siembra
Mechero Bunsen
Gradilla
Placas con agar sangre.
Placas con agar Levine (10g/l de peptona, 10g/l de lactosa, 3g/l de K2HPO4, 0,4g/l amarillo eosina, 0,065g/l de azul de metileno, 14g/l de agar)
Placas con agar McConkey (10g/l de lactosa, 3g/l de peptonas, 1,5g/l de sales biliares, 17g/l de peptona de gelatina, 0,03g/l de rojo neutro, 5g/l de cloruro de sodio, 0,001g/l de cristal violeta, 13,5g/l de agar, pH 7,1)
PROCEDIMIENTO:
Rotulamos la placa de Petri con la fecha y la siembra que vayamos a realizar. Encendemos el mechero y esterilizamos el asa de platino. Cogemos la placa en la que está uno de los cultivos, y clavamos el asa en cualquier sitio donde no haya crecimiento para enfriar el asa de siembra. Vamos a la zona con crecimiento y deslizamos el asa por encima para arrastras una muestra representativa del cultivo. Cerramos la placa y cogemos la placa que no está sembrada aún, la abrimos y desde arriba empezamos a depositar la muestra en zig-zag, sin llegar al centro de la placa, la cerramos y esterilizamos el asa. Volvemos a abrir la placa, enfriamos el asa en una zona sin sembrar aún, y tocando con el asa las un par de estrías ya realizadas, volvemos a hacer surcos en zig-zag, y repetimos el mismo procedimiento hasta un total de cuatro veces, la última acabando en el centro de la placa y con los surcos más espaciados entre sí. Adjunto un dibujo de como se deben realizar las siembras.
Después de hacer el último, se vuelve a esterilizar el asa y se cierra la placa. Se guarda en la estufa a 37ºC durante unas 48 - 72 horas.
RESULTADOS:
A las 48 - 72 horas de haber sembrado nuestra muestra, podemos empezar a ver el aumento de la población celular.
En las placas con agar McConkey y Levine no se observa crecimiento bacteriano. En la placa con agar sangre podemos observar, a parte del crecimiento, que se ha producido alfa hemólisis.
Levine McConkey Agar sangre
Mediante la siembra de bacterias en estos medios, con diferentes composiciones, podremos conocer algunas funciones específicas de las bacterias que nos ayudaran a clasificarlas taxonómicamente.
FUNDAMENTO:
Los medios sobre los que se realiza la siembra están compuestos por diferentes ingredientes, de los cuales algunos inhiben el crecimiento de algunas bacterias, otros las ayudan a proliferar, y otros nos permiten observar funciones de la bacteria mediante cambios de color (pH) o aparición de estrías incoloras, por ejemplo.
MATERIAL:
Cultivo celular número 2 y 9
Asa de siembra
Mechero Bunsen
Gradilla
Placas con agar sangre.
Placas con agar Levine (10g/l de peptona, 10g/l de lactosa, 3g/l de K2HPO4, 0,4g/l amarillo eosina, 0,065g/l de azul de metileno, 14g/l de agar)
Placas con agar McConkey (10g/l de lactosa, 3g/l de peptonas, 1,5g/l de sales biliares, 17g/l de peptona de gelatina, 0,03g/l de rojo neutro, 5g/l de cloruro de sodio, 0,001g/l de cristal violeta, 13,5g/l de agar, pH 7,1)
PROCEDIMIENTO:
Rotulamos la placa de Petri con la fecha y la siembra que vayamos a realizar. Encendemos el mechero y esterilizamos el asa de platino. Cogemos la placa en la que está uno de los cultivos, y clavamos el asa en cualquier sitio donde no haya crecimiento para enfriar el asa de siembra. Vamos a la zona con crecimiento y deslizamos el asa por encima para arrastras una muestra representativa del cultivo. Cerramos la placa y cogemos la placa que no está sembrada aún, la abrimos y desde arriba empezamos a depositar la muestra en zig-zag, sin llegar al centro de la placa, la cerramos y esterilizamos el asa. Volvemos a abrir la placa, enfriamos el asa en una zona sin sembrar aún, y tocando con el asa las un par de estrías ya realizadas, volvemos a hacer surcos en zig-zag, y repetimos el mismo procedimiento hasta un total de cuatro veces, la última acabando en el centro de la placa y con los surcos más espaciados entre sí. Adjunto un dibujo de como se deben realizar las siembras.
Después de hacer el último, se vuelve a esterilizar el asa y se cierra la placa. Se guarda en la estufa a 37ºC durante unas 48 - 72 horas.
RESULTADOS:
A las 48 - 72 horas de haber sembrado nuestra muestra, podemos empezar a ver el aumento de la población celular.
En las placas con agar McConkey y Levine no se observa crecimiento bacteriano. En la placa con agar sangre podemos observar, a parte del crecimiento, que se ha producido alfa hemólisis.
Levine McConkey Agar sangre
Comentarios
Publicar un comentario