IMVIC
OBJETIVO:
La realización de esta práctica permite la identificación de enterobacterias, según su resultado en las distintas pruebas.
FUNDAMENTO:
- Indol: Se usa para saber si la bacteria tiene la enzima triptofanasa, que degrada el triptófano. Si se produce la degradación, se libera indol, que al echarle reactico de Kovacs, forma un compuesto coloreado. Se usa el medio líquido agua de peptona.
- Rojo de metilo: Mediante esta prueba podemos saber si la bacteria fermenta la glucosa mediante la vía ácido mixta, con producción de ácido. Se usa el medio MRVP para sembrarla, y se le echa rojo de metilo, un indicador de pH, que vira a rojo si se produce esa fermentación.
- Voges - Proskauer: Mediante esta prueba podemos saber si la bacteria fermenta la glucosa mediante la vía butanodiólica. En esta vía se produce acetoína, que al añadirle alfa-naftol, produce un color rojizo. Se usa el medio líquido MRVP
- Citrato: Se usa citrato de Simons como medio. Se valora si la bacteria es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y los compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno. El medio tiene azul de bromotimol que vira a azul según el pH, siendo así la prueba positiva.
MATERIAL:
Medios MRVP, agua de peptona, citrato de Simons, mechero bunsen, muestras de microorganismos 2 y 9, asa de siembra, reactivos (rojo metilo, Kovacs, VpA, VpB) pipeta pasteur, gradilla.
PROCEDIMIENTO:
Inicialmente hacemos una siembra de los microorganismos en cada uno de los medios, e incubamos 24 horas.
Tras incubar, vamos a añadir los reactivos para comprobar el resultado de las pruebas.
- Indol: añadimos al medio 5 gotas de reactivo de Kovacs, y sin moverlo, tapamos y esperamos para ver si se forma un anillo rojo en la parte superior. Si se forma, es positiva.
- Rojo de metilo: añadimos al medio 5 gotas de rojo de metilo y homogeneizamos por rotación, si el medio adquiere un color rojo vivo y homogeneo en todo el medio, es positiva.
- Voges - proskauer: Añadimos 12 gotas de alfa- naftol (vpb) y 4 gotas de KOH (vpa), homogeneizamos por rotación, y lo apoyamos en una gradilla para que la superficie en contacto con el oxigeno sea lo mayor posible. Esperamos 5-10 minutos, si adquiere un color rosa, es positiva.
-Citrato: Comprobamos si el medio sigue verde o ha adquirido un tono azul. Si está azul, es positiva.
RESULTADOS:
Indol: Negativa para 2 y 9
Rojo de metilo: Negativa para 2 y 9
Voges - proskauer: Negativa para 2 y 9
Citrato: Negativa para 2 y 9.
La realización de esta práctica permite la identificación de enterobacterias, según su resultado en las distintas pruebas.
FUNDAMENTO:
- Indol: Se usa para saber si la bacteria tiene la enzima triptofanasa, que degrada el triptófano. Si se produce la degradación, se libera indol, que al echarle reactico de Kovacs, forma un compuesto coloreado. Se usa el medio líquido agua de peptona.
- Rojo de metilo: Mediante esta prueba podemos saber si la bacteria fermenta la glucosa mediante la vía ácido mixta, con producción de ácido. Se usa el medio MRVP para sembrarla, y se le echa rojo de metilo, un indicador de pH, que vira a rojo si se produce esa fermentación.
- Voges - Proskauer: Mediante esta prueba podemos saber si la bacteria fermenta la glucosa mediante la vía butanodiólica. En esta vía se produce acetoína, que al añadirle alfa-naftol, produce un color rojizo. Se usa el medio líquido MRVP
- Citrato: Se usa citrato de Simons como medio. Se valora si la bacteria es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y los compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno. El medio tiene azul de bromotimol que vira a azul según el pH, siendo así la prueba positiva.
MATERIAL:
Medios MRVP, agua de peptona, citrato de Simons, mechero bunsen, muestras de microorganismos 2 y 9, asa de siembra, reactivos (rojo metilo, Kovacs, VpA, VpB) pipeta pasteur, gradilla.
PROCEDIMIENTO:
Inicialmente hacemos una siembra de los microorganismos en cada uno de los medios, e incubamos 24 horas.
Tras incubar, vamos a añadir los reactivos para comprobar el resultado de las pruebas.
- Indol: añadimos al medio 5 gotas de reactivo de Kovacs, y sin moverlo, tapamos y esperamos para ver si se forma un anillo rojo en la parte superior. Si se forma, es positiva.
- Rojo de metilo: añadimos al medio 5 gotas de rojo de metilo y homogeneizamos por rotación, si el medio adquiere un color rojo vivo y homogeneo en todo el medio, es positiva.
- Voges - proskauer: Añadimos 12 gotas de alfa- naftol (vpb) y 4 gotas de KOH (vpa), homogeneizamos por rotación, y lo apoyamos en una gradilla para que la superficie en contacto con el oxigeno sea lo mayor posible. Esperamos 5-10 minutos, si adquiere un color rosa, es positiva.
-Citrato: Comprobamos si el medio sigue verde o ha adquirido un tono azul. Si está azul, es positiva.
RESULTADOS:
Indol: Negativa para 2 y 9
Rojo de metilo: Negativa para 2 y 9
Voges - proskauer: Negativa para 2 y 9
Citrato: Negativa para 2 y 9.
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