EXTRACCIÓN DE DNA BACTERIANO DE HISOPOS BUCALES
OBJETIVO:
Extraemos el DNA de muestras de hisopos bucales para poder cuantificarlo.
FUNDAMENTO:
La extracción se realiza con un kit de extracción de DNA, siguiendo los pasos que nos indica el protocolo.
PROTOCOLO:
- Ponemos el hisopo en PBS durante 10 minutos y vortexamos 30 segundos.- Centrifugamos y retiramos el sobrenadante.
- Añadimos 180ul de buffer ATL y 20ul de proteinasa K.
- Incubamos en agitación a 56º durante 15 minutos.
- Añadimos 200ul de buffer AL e incubamos 10 minutos a 70º.
- Añadimos 200ul de etanol puro y ponemos toda la mezcla en una columna de separación, centrifugamos y cambiamos el tubo colector.
- Añadimos 200ul de buffer AW1, centrifugamos, cambiamos la columna, y hacemos lo mismo con AW2.
- Ponemos la columna en un eppendorf y añadimos 70ul de buffer AE, y centrifugamos.
Lo que obtenemos en el eppendorf es ya el DNA. Para cuantificarlo, usamos otro kit de reactivos y el cuantificador.
Extraemos el DNA de muestras de hisopos bucales para poder cuantificarlo.
FUNDAMENTO:
La extracción se realiza con un kit de extracción de DNA, siguiendo los pasos que nos indica el protocolo.
PROTOCOLO:
- Ponemos el hisopo en PBS durante 10 minutos y vortexamos 30 segundos.- Centrifugamos y retiramos el sobrenadante.
- Añadimos 180ul de buffer ATL y 20ul de proteinasa K.
- Incubamos en agitación a 56º durante 15 minutos.
- Añadimos 200ul de buffer AL e incubamos 10 minutos a 70º.
- Añadimos 200ul de etanol puro y ponemos toda la mezcla en una columna de separación, centrifugamos y cambiamos el tubo colector.
- Añadimos 200ul de buffer AW1, centrifugamos, cambiamos la columna, y hacemos lo mismo con AW2.
- Ponemos la columna en un eppendorf y añadimos 70ul de buffer AE, y centrifugamos.
Lo que obtenemos en el eppendorf es ya el DNA. Para cuantificarlo, usamos otro kit de reactivos y el cuantificador.
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