MICROBIOLOGÍA BLANCA ESPÍN

OBJETIVO: Este estudio se realiza para probar un posible material para prótesis, y conocer como actúan las bacterias sobre él. FUNDAMENTO: Se incuban distintas especies bacterianas en dos tubos distintos, uno de ellos, vacío, otro, con bioglass, durante un día. Se realizan suspensiones de 0,5 McFarland, y se realizan distintas diluciones. En una placa de Petri, se depositan cinco gotas de 10ul de cada dilución, separadas entre sí, y se dejan secar. Se incuban durante 24 horas, y se hace un recuento de las colonias que hay en cada una de las gotas, contando siempre una sola fila de diluciones, la primera que se pueda contar.

OBJETIVO: Realizamos esta práctica para conocer como se comportan las bacterias sobre las superficies de distintos materiales protésicos. FUNDAMENTO: Se realiza de dos formas; una que nos permitirá ver el crecimiento mediante el recuento en placas de Petri, otra en la que observamos en crecimiento con aplicando un colorante y cuantificando espectrofotométricamente. Tenemos discos de titanio, cobalto y bioloy, con superficies lisas y rugosas para los tres materiales. Se introducen los discos en placas con pocillos, y se deposita una gota de suspensión bacteriana sobre cada uno de los discos, y se hacen tres incubaciones distintas: de 30 minutos, de 60 minutos y de 120 minutos. Una vez cumplido el tiempo de incubación, se hacen lavados de los discos, para retirar todo el material bacteriano posible y dejar simplemente el adherido al disco.  Para la cuantificación en placas de Petri, se añade DTT para retirar las bacterias adheridas, y se siembran 100 microlitros en una

OBJETIVO: Extraemos el DNA de muestras de hisopos bucales para poder cuantificarlo. FUNDAMENTO: La extracción se realiza con un kit de extracción de DNA, siguiendo los pasos que nos indica el protocolo. PROTOCOLO: - Ponemos el hisopo en PBS durante 10 minutos y vortexamos 30 segundos. - Centrifugamos y retiramos el sobrenadante. - Añadimos 180ul de buffer ATL y 20ul de proteinasa K. - Incubamos en agitación a 56º durante 15 minutos. - Añadimos 200ul de buffer AL e incubamos 10 minutos a 70º. - Añadimos 200ul de etanol puro y ponemos toda la mezcla en una columna de separación, centrifugamos y cambiamos el tubo colector. - Añadimos 200ul de buffer AW1, centrifugamos, cambiamos la columna, y hacemos lo mismo con AW2. - Ponemos la columna en un eppendorf y añadimos 70ul de buffer AE, y centrifugamos. Lo que obtenemos en el eppendorf es ya el DNA. Para cuantificarlo, usamos otro kit de reactivos y el cuantificador.

OBJETIVO: Extraemos el DNA de muestras de líquido sinovial para poder cuantificarlo. FUNDAMENTO: La extracción se realiza con un kit de extracción de DNA, siguiendo los pasos que nos indica el protocolo. PROTOCOLO: - Se depositan 0,6ml de muestra en un eppendorf, centrifugamos y retiramos el sobrenadante. - Añadimos 180ul de buffer ATL y 20ul de proteinasa K. - Incubamos en agitación a 56º durante 15 minutos. - Añadimos 200ul de buffer AL e incubamos 10 minutos a 70º. - Añadimos 200ul de etanol puro y ponemos toda la mezcla en una columna de separación, centrifugamos y cambiamos el tubo colector. - Añadimos 200ul de buffer AW1, centrifugamos, cambiamos la columna, y hacemos lo mismo con AW2. - Ponemos la columna en un eppendorf y añadimos 70ul de buffer AE, y centrifugamos. Lo que obtenemos en el eppendorf es ya el DNA. Para cuantificarlo, usamos otro kit de reactivos y el cuantificador.

OBJETIVO: Realizamos esta práctica para conocer las distintas resistencias o sensibilidades de distintas cepas de  Staphylococcus aureus  ante distintos antibióticos. FUNDAMENTO: Preparamos medios de cultivo añadiento distintas concentraciónes de antibióticos (Daptomicina, Vancomicina, Teicoplanina y Oxacilina), una vez están sólidos, sembramos las distintas cepas en los medios con distintas concentraciones de antibiótico, e incubamos durante un día. Al día siguiente, hacemos un recuento manual de las colonias que han aparecido en cada placa.

OBJETIVO: Realizamos esta práctica para conocer las distintas resistencias o sensibilidades de distintas cepas de Staphylococcus aureus ante distintos antibióticos. FUNDAMENTO: Hacemos una siembra de las distintas cepas en distintas placas de Petri, y con pinzas, depositamos los E - test, que vienen ya preparados, sobre el medio de cultivo. Incubamos durante 24 horas, y comprobamos a que concentración corresponden los halos de inhibición. Los antibióticos utilizados son: Vancomicina, Daptomicina, Oxacilina y Teicoplanina.

OBJETIVO:  Aislar una nueva cepa de una especie bacteriana para posteriormente guardarla en la cepoteca. FUNDAMENTO: Cuando en alguna prueba con antibióticos, encontramos algún brote de resistencia aislado, hacemos una siembra de esas bacterias en una placa de Petri, y la incubamos durante un día. Después, hacemos una suspensión de las colonias más aisladas y definidas en un eppendorf con SSF, y lo congelamos a -80ºC.

OBJETIVO: Realizamos esta práctica (MIC) con la finalidad de conocer la concentración mínima de antibiótico necesaria para evitar el crecimiento de una especie bacteriana, y para conocer la concentración mínima de antibiótico necesaria para eliminar en su totalidad las bacterias de esa especie. FUNDAMENTO: MIC: En una placa con 96 pocillos se introduce un volumen de suspensión bacteriana (0,5 McFarland) junto con caldo de cultivo y antibióticos diluidos, se incuba durante un día y se observa el pocillo en el que no hay crecimiento con la mínima concentración de antibiótico.  MBC: En placas de petri con medio de cultivo se ponen gotas de los pocillos en los que no ha habido crecimiento de 10 microlitros, y se incuban durante un día para saber a que concentración el antibiótico a eliminado las bacterias totalmente. Los antibióticos usados fueron: Vancomicina, Teicoplanina, Oxacilina y Daptomicina.